Pesquisa de instabilidade de microssatélites e imuno-histoquímica para MLH1 e MSH2 ajudam a indicar teste genético.

Pesquisa imuno-histoquímica para MLH1 (à esq.) e MSH2 (à dir.). Neste caso, houve perda da marcação nuclear para MLH1 nas células tumorais. Já a imunoexpressão de MSH2 encontra-se preservada (setas vermelhas). A expressão dessas proteínas está constitucionalmente resguardada em linfócitos (setas amarelas).

Os tumores malignos que acometem o cólon e o reto estão entre as neoplasias mais prevalentes em adultos de ambos os sexos, ocorrendo, em sua grande maioria, de forma esporádica. No entanto, cerca de 5% dos casos de câncer colorretal (CCR) têm natureza hereditária, consequente à presença de mutação em uma das cópias de genes envolvidos com a manutenção da integridade do DNA. Essa condição, conhecida como síndrome do câncer colorretal hereditário não-poliposo (HNPCC), ou síndrome de Lynch, é causada, em 90% dos casos, por mutação nos genes MSH2 e MLH1 e, na quase-totalidade dos 10% restantes, por alteração nos genes MSH6 e PMS2. A HNPCC associa-se a maior risco não somente de CCR, mas também de neoplasias malignas de endométrio, ovário e estômago, entre outras. Contudo, a identificação de alterações patogênicas nos genes relacionados com a síndrome de Lynch é bastante trabalhosa e tem de ser criteriosamente indicada. Para tanto, recomenda-se que indivíduos com CCR que preencham os critérios de Bethesda (2004) tenham amostra de seu tecido tumoral submetida à pesquisa de instabilidade de microssatélites (MSI), que determina a chance de existir mutação patogênica em um desses quatro genes que realizam o reparo do DNA. Quando há instabilidade, essa probabilidade é grande. Estima-se que os microssatélites se mostrem instáveis no tecido tumoral de 90% dos indivíduos com HNPCC e em 15% dos que têm CCR esporádico.

Já a definição do gene responsável pode ser facilitada com o uso da imuno-histoquímica no tecido tumoral, voltada para a detecção de proteínas codificadas por esses genes. Quando não ocorre reatividade para uma delas, aumenta a chance de a mutação estar localizada no gene que codifica essa proteína, razão pela qual seu sequenciamento deve ser priorizado.

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O que são microssatélites e por que eles podem se mostrar instáveis?

Microssatélites são sequências de DNA constituídas em geral por repetições de dois ou três nucleotídeos, que passam de uma geração para outra de forma permanente. Habitualmente, há uma significativa variação interindividual no número de repetições contidas nos microssatélites, o que faz com que eles sejam considerados polimórficos. Essa quantidade mantém-se estável em todas as células de uma pessoa, sejam elas germinativas, sejam elas somáticas. No entanto, quando ocorre um defeito no sistema que zela pela integridade do mecanismo de replicação do DNA, o número de repetições dos microssatélites se torna instável, com expansões e contrações. Tal fenômeno é particularmente evidente em certas neoplasias, como os tumores colorretais provenientes de mutações herdadas nos genes de reparo do DNA.

FICHAS TÉCNICAS

Pesquisa de instabilidade de microssatélites

Material	Técnica	Tempo de análise	Interpretação
Amostra de tecido tumoral, em formol ou em parafina, e sangue periférico	Determinação do número de repetições dos microssatélites BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24 e MONO-27	Até 20 dias corridos	O número de repetições dos microssatélites no tecido tumoral deve ser igual ao encontrado no sangue periférico

Detecção do produto gênico de MSH2 e MLH1

Material	Técnica	Tempo de análise	Interpretação
Amostra de tecido tumoral, em formol ou em parafina	Imuno-histoquímica	Seis dias úteis	A ausência do produto de um dos genes é indicativa da existência de mutação nesse gene