Finalmente um teste para diferenciar entre meningite viral e bacteriana em apenas duas horas | Revista Médica Ed. 5 - 2012

O sequenciamento genômico de microrganismos patogênicos para o ser humano contribuiu sobremaneira para a acurácia e a agilidade do diagnóstico das doenças infecciosas por meio da detecção de segmentos específicos de ácidos nucleicos em amostras de natureza variada, que tem sido crescentemente utilizada não somente no contexto assistencial individualizado, mas também na Saúde Pública. Contudo, a aplicação da Biologia Molecular por vezes esbarra na necessidade de laboratórios bem equipados, com arquitetura especial, e de pessoal altamente qualificado para a execução e a interpretação das técnicas.

Foi em resposta a esses obstáculos que surgiu o sistema GeneXpert® (Cepheid, EUA), a primeira plataforma baseada em PCR em tempo real completamente automatizada e integrada. Usando amostras clínicas brutas, a tecnologia amplifica e detecta segmentos-alvo dos genes de agentes infecciosos sem necessitar de processo manual prévio ou intermediário, liberando os resultados em cerca de 45 a 90 minutos, conforme o teste, por conta da detecção simultânea à amplificação e da presença de um dispositivo que interrompe a reação tão logo se identifique o alvo.

O sistema automatiza até mesmo a complexa etapa de preparação da amostra para extração de DNA ou RNA do microrganismo pesquisado. O uso de um cartucho com câmaras microfluídicas viabiliza a integração das fases, já que, depois de concluída a extração, o concentrado de ácido nucleico é transferido à câmara onde ocorrem sua amplificação e sua detecção.

O mesmo equipamento que executa essas etapas da análise contém um software, associado a um sistema de leitura de código de barras, que emite o resultado assim que a análise é finalizada. Toda essa automação, entretanto, não alterou um dos principais diferenciais da PCR em tempo real: sua elevada sensibilidade. Uma vez que a preparação da amostra no GeneXpert® inclui a concentração e a purificação do material extraído, a quantidade inicial de ácido nucleico é maior, o que torna o método ainda mais sensível.

Embora o padrão-ouro para a detecção do Clostridium difficile, o principal responsável pelas colites associadas ao uso de antimicrobianos, seja a cultura toxigênica, esse método tem seu emprego limitado pelo tempo prolongado de execução, de três a cinco dias. Em contraste, a PCR em tempo real pelo GeneXpert®, que detecta o gene que codifica a toxina B (tcdB) em amostra de fezes, libera o resultado no mesmo dia da coleta, sem perda da acurácia diagnóstica em comparação à cultura. Ademais, apresenta valor preditivo negativo superior ao exibido pela pesquisa das toxinas A e B por ensaio imunoenzimático, a técnica mais difundida para essa investigação.