PCR em tempo real garante agilidade e especificidade na detecção do M. tuberculosis2 | Revista Médica Ed. 1 - 2014

Entre as diversas metodologias usadas para o diagnóstico da tuberculose, as que detectam a presença do bacilo incluem a baciloscopia, a cultura para micobactérias, considerada padrão-ouro, e os exames de biologia molecular. Estes se fundamentam na detecção de regiões específicas, como a sequência de inserção IS6110, do genoma das espécies do complexo Mycobacterium tuberculosis, que compreende M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti e M. pinnipedii. Tal alvo é particularmente estratégico porque está presente em múltiplas cópias na maioria das cepas de M. tuber­culosis, o que aumenta a sensibilidade do teste molecular.

Por meio de um levantamento em seu banco de dados, as equipes de Microbiologia e Biologia Molecular do Fleury analisaram 618 amostras de diferentes sítios anatômicos, com o objetivo de determinar a sensibilidade e a especificidade da reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real com o kit MTB Q-PCR Alert, Nanogen, utilizando, como padrão-ouro, a cultura para micobactérias em meio de Lowenstein-Jensen e caldo MGIT. As discrepâncias foram resolvidas por meio da avaliação de resultados anteriores de cultura e exames histopatológicos, quando disponíveis

Das 618 amostras analisadas, 39 foram positivas no exame de PCR, das quais oito apresentaram resultado negativo na cultura. Duas amostras, cujos exames de PCR evidenciaram positividade com cultura negativa no mesmo período, haviam apresentado cultura positiva para M. tuberculosis cerca de dois meses antes. Entre as 579 negativas no teste molecular, nove tiveram resultado positivo na cultura.

Esses achados apontaram uma sensibilidade de 78,6% e uma especificidade de 98,9% da PCR em relação à cultura para M. tuberculosis. “A grande vantagem do teste molecular sobre o exame microbiológico é sua rapidez”, comenta o assessor médico do Fleury em Microbiologia, Jorge Sampaio. Enquanto a cultura requer longo período de incubação para a obtenção dos resultados (de 10 a 42 dias), o resultado da PCR em tempo real é usualmente liberado em dois dias úteis. “Outra vantagem da PCR é o fato de ela poder ser realizada com DNA extraído de fragmentos de tecido fixados em formol e/ou incluídos em parafina, permitindo o diagnóstico etiológico nos casos em que foi feito apenas o anatomopatológico“, acrescenta Sampaio.

Agrupamento de Mycobacterium tuberculosis revelado por micrografia eletrônica de varredura.
SPL DC/ Latinstock